盤點探針與qPCR儀之間的“默契密碼”

盤點探針與qPCR儀之間的“默契密碼"

    在PCR實驗中，探針是一種關(guān)鍵的工具，用于增強實驗的特異性和靈敏度，因此探針在檢測中被廣泛地使用。

探針是一段與目標DNA或RNA序列互補的寡核苷酸，通常包含一個熒光基團和一個淬滅基團。在PCR反應中起到特異性識別和信號放大的作用。在PCR擴增過程中，探針與目標DNA或RNA結(jié)合，當PCR酶(如Taq酶)在延伸階段切割探針時，釋放出熒光基團，從而允許熒光檢測器檢測到熒光信號。

       探針種類眾多，有TaqMan探針、分子信標、雙雜交探針、小凹槽結(jié)合劑(MGB)探針、蝎形探針、LUX探針等，均依賴于某種形式的共價連接的熒光淬滅基團分子，該分子在特定目標序列存在時被釋放。

     探針如何適配PCR儀：

     一、明確熒光基團

  首先，您需要明確所使用的探針對應的熒光基團。不同類型的探針會使用不同的熒光報告基團和淬滅基團這些信息通常可以在探針供應商提供的產(chǎn)品說明書中找到，確認其激發(fā)波長和發(fā)射波長的大致范圍。以下是一些常用的熒光基團及其對應的激發(fā)波長(Ex)和發(fā)射波長(Em)



     二、對比qPCR儀濾光片




若不在表1的范圍內(nèi)，理論上，只要探針所使用的熒光基團的激發(fā)波長和發(fā)射波長跟儀器的濾光片的設置相配即可，就是只要最終熒光信號在儀器的檢測范圍內(nèi)，結(jié)果都可以被檢出。